Inmunohistoquímica

La inmunohistoquímica es una técnica que juega un papel muy importante en la rutina del laboratorio de anatomía patológica ; de hecho, es capaz de identificar moléculas o estructuras específicas del compartimento intra y extracelular. La técnica inmunohistoquímica se basa en el principio de conjugación antígeno-anticuerpo además de sistemas de detección (enzimáticos, fluorescentes) que hacen visible la reacción al microscopio. Hay métodos directos o indirectos.

Descripción

En los métodos directos se utiliza un solo anticuerpo dirigido contra la molécula a buscar y este mismo anticuerpo se une a una sustancia coloreada que permite su visualización. En los métodos indirectos se utilizan dos anticuerpos: el primero dirigido contra la molécula a investigar, el segundo, conjugado con la sustancia coloreada, se unirá al primer anticuerpo.

La molécula a buscar en la sección de tejido que se examina es reconocida por un anticuerpo producido por un animal inmunizado contra esa molécula. En métodos indirectos es necesario que el segundo anticuerpo provenga de una especie diferente

Hoy en día, en lugar de anticuerpos secundarios, se utilizan polímeros ( dextrano ) producidos con técnicas de ingeniería que consisten en cadenas de azúcares unidas a anticuerpos y colorantes al mismo tiempo. Una posible aplicación podría ser resaltar la queratina en un tumor de células fusiformes y hacer un diagnóstico diferencial entre sarcomas y carcinomas cuyas células han sufrido una transición epitelial-mesenquimatosa.

Técnicas utilizadas

La técnica, a partir de la diapositiva ya preparada, se puede resumir brevemente de la siguiente manera:

• recuperación antigénica en caso de que el antígeno a buscar haya sido modificado o enmascarado por las técnicas de preparación de portaobjetos;
• inhibición de enzimas y otras sustancias endógenas que podrían reaccionar de forma cruzada con los métodos de tinción utilizados;
• incubación con anticuerpo primario;
• desarrollo de la coloración si el método es directo;
• incubación con anticuerpo secundario (o polímero conjugado) si el método es indirecto;
• desarrollo de la coloración.

La técnica se realiza después de fijar la sección en el portaobjetos y luego reaccionar con el anticuerpo monoclonal específico para la sustancia que está buscando. Dependiendo de la técnica, también es posible utilizar dos anticuerpos: el primero contra el antígeno y el segundo contra Fc (porción constante de la cadena pesada de la inmunoglobulina ); dado que una enzima está asociada con el anticuerpo (muy a menudo la peroxidasa de rábano picante ), este desdoblando los colores de su sustrato con el producto obtiene las áreas del campo donde está presente la sustancia y las hace visibles al microscopio óptico como áreas marrones.

Otras técnicas inmunológicas similares para la tinción de los portaobjetos son la inmunofluorescencia (que utiliza Ig marcadas con fluorocromos en lugar de una enzima ), la conjugación de anticuerpos con sustancias radiactivas (técnica actualmente poco utilizada ya que los métodos químicos son más sensibles, menos peligrosos y no requieren personal especializado en el manejo de radioisótopos) y para microscopía electrónica es posible combinar el ig con partículas de oro coloidal que son electrondensas en ME (también una técnica poco utilizada).

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Enlaces externos

• ( EN ) Inmunohistoquímica , en Encyclopedia Britannica , Encyclopædia Britannica, Inc.